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Protocolo de congelación de la célula

By Jamie

La preservación de células a través de la congelación es esencial para la investigación, la medicina veterinaria y cría de animales, ya que permite que las células pueden almacenar durante largos períodos de tiempo. El método de congelación seleccionado, sin embargo, debe reducir o prevenir el daño a la célula. El agente de criopreservación y el método pueden depender del tipo de célula.

Preparación

Las células deben congelarse cuando están sanos y en crecimiento activo con una viabilidad del 90 por ciento. Se debe tener cuidado en la manipulación y la centrifugación de alta velocidad y de pipeteo vigoroso o debe evitar la succión para mantener la viabilidad y prevenir el daño celular.

Crioprotección

Un agente crioprotector se utiliza como un sustituto para el agua intracelular. El agente impide que los cristales de hielo y la deshidratación que ocurren en las células. Glicerol esterilizada y esterilizada dimetilsulfóxido se utilizan a menudo en una concentración de 5 por ciento a 15 por ciento (volumen por volumen), ya sea diluido en suero de ternera fetal o medio de crecimiento, dependiendo del tipo de célula.

Congelación y almacenamiento

Las células en la mezcla de congelación deben enfriarse lentamente. Si un congelador programable no está disponible, crioviales se pueden envolver en el tejido o colocados en espuma de poliestireno, lo que puede ralentizar el proceso de congelación. Las células deben mantenerse a menos 80 grados Celsius durante 24 horas y después se transfirieron a nitrógeno líquido para almacenamiento a largo plazo.

La descongelación

Células congeladas deben descongelarse rápidamente. Un baño de agua a 37 grados Celsius puede ser utilizado. Se debe tener cuidado con las células almacenadas en nitrógeno líquido, sin embargo, como el nitrógeno líquido puede entrar en los viales y puede explotar en la descongelación. La mezcla de congelación debe ser diluido en medio de cultivo. La viabilidad celular se debe evaluar con el colorante azul de tripano y las células cultivadas como normal.