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Protocolo de tinción intracelular de Citometría de Flujo

By Jamie

La citometría de flujo es una herramienta que es útil en el estudio de las proteínas celulares. Se utiliza la emisión de luz o fluorescencia de las proteínas dentro de la célula. Los anticuerpos o sondas marcadas con fluorescencia se utilizan para estudiar las proteínas específicas. La citometría de flujo se utiliza para diagnosticar una serie de enfermedades, incluyendo el cáncer, pero también es útil en la investigación médica.

Fijar las células

Las células deben fijarse para mantener la estabilidad de las proteínas intracelulares. Un número de fijadores se puede utilizar tal como formaldehído o acetona enfriada con hielo. Después de la fijación, la membrana celular necesita ser permealized para permitir que el anticuerpo para entrar en la célula. Detergentes tales como Triton o NP-40, o metanol enfriado con hielo se pueden utilizar para hacer agujeros en la membrana celular.

La tinción

Lavar las células en el tampón de bloqueo 0,5 por ciento de albúmina de suero bovino diluido en solución salina tamponada con fosfato, BSA / PBS. Las células se incubaron en tampón de bloqueo para reducir la unión no específica. Añadir anticuerpo primario diluido en tampón de bloqueo y dejar incubar a temperatura ambiente, para la longitud de tiempo optimizado. Lavar con tampón de bloqueo.

Análisis

Incubar el anticuerpo secundario, que está marcado con una etiqueta fluorescente, a temperatura ambiente durante 30 minutos. Para eliminar las células de lavado de anticuerpos no unidos en tampón de bloqueo. Girar las células en un gránulo y luego resuspender en PBS y analizar el citómetro de flujo.