Protocolo de inclusión en parafina

By Jamie

Protocolo de inclusión en parafina


Los científicos por lo general necesitan para solidificar las muestras biológicas a la sección a retirarse. Esto hace que sea más fácil para los científicos para agregar colorantes, anticuerpos y sondas a la muestra biológica. También reduce la superposición de varias capas de células. Los científicos usan cera de parafina como una matriz dura para el corte, ya que la parafina no se mezcla con agua. La parafina es un tipo de hidrocarburo. Las muestras biológicas contienen agua, por lo que los científicos deben deshidratar las muestras usando baños de etanol cada vez más concentrados.

Xileno

Los científicos eliminan el etanol usando xileno. Después usan cera de parafina fundida para eliminar el xileno. Para la microscopía de luz, los cortes de parafina son generalmente de cinco micras de espesor. La cera de parafina no es lo suficientemente fuerte para cortes más delgados. Los científicos rehidratar el tejido mediante el uso de xileno primero, a continuación, etanol. Luego enjuague la muestra biológica con agua destilada para evitar la contaminación.

Fijación

Tejidos embebidos en parafina normalmente se fijan mediante formalina tamponada neutra, que es la versión comercial de formaldehído. Esto incluye paraformaldehído y metanol, que impide que el formaldehído de la conversión en ácido fórmico. Tejidos en rodajas finas necesitan 48 horas de fijación a temperatura ambiente durante la histología óptimo, que es el estudio de la anatomía microscópica. De lo contrario, el tejido se endurece y se vuelven frágiles. Antes de la transformación, el tejido normalmente se almacena en el 70 por ciento de etanol a una temperatura de 4 grados Celsius.

Procesadores de parafina

Los científicos a menudo utilizan procesadores de parafina para enviar el tejido a través de baños que deshidratan gradualmente el material antes de parafina caliente puede entrar a través de los tejidos. Los científicos corren el procesador durante la noche. El procesador sólo calienta el tejido durante un cierto período de tiempo dependiente sobre el tejido para hacer que no se convierta duro y quebradizo. El procesador utiliza un vacío que acelera la penetración de la parafina y elimina las burbujas de aire. Una vez procesados, los tejidos se almacenan en casetes a temperatura ambiente.

Cera de fusión

La parafina se funde durante una hora antes de añadir el tejido. El casete entero se coloca en un baño de parafina de 65 grados Celsius durante 15 minutos. Un disipador de calor de aluminio frío enfría la cera de parafina durante 20 minutos. Cuando las grietas de cera o los tejidos no están alineados correctamente, el científico se funde la parafina y repite el proceso.

Corte

Al seccionar los tejidos, el científico obtiene el baño de agua a 35 a 37 grados Celsius. El agua es fresca y desionizada. Los bloques se colocan boca abajo en un bloque de hielo o disipador de calor durante 10 minutos. Una cuchilla corta el bloque en secciones. Dos problemas que pueden ocurrir son pobres ribboning y especímenes fragmentación. Cuando el fragmento de especímenes, el agua está demasiado caliente. Si el bloque no la cinta así, usted debe poner de nuevo en el bloque de hielo y firme encima de la cera antes de comenzar de nuevo.

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